بازگیر, مرضیه, شمس, نعمت, فروهرمهر, علی, جایدری, امین, نظیفی, نرگس. (1401). مهندسی یک پروتئین کایمریک نوترکیب متشکل از آنتیژن OmpL متصل شده به ادجوانت مولکولی HBHA (HBHA-OmpL) با هدف توسعه واکسن بر علیه سالمونلا تیفیموریوم. سامانه مدیریت نشریات علمی, (), -. doi: 10.22092/vj.2022.359453.1995
مرضیه بازگیر; نعمت شمس; علی فروهرمهر; امین جایدری; نرگس نظیفی. "مهندسی یک پروتئین کایمریک نوترکیب متشکل از آنتیژن OmpL متصل شده به ادجوانت مولکولی HBHA (HBHA-OmpL) با هدف توسعه واکسن بر علیه سالمونلا تیفیموریوم". سامانه مدیریت نشریات علمی, , , 1401, -. doi: 10.22092/vj.2022.359453.1995
بازگیر, مرضیه, شمس, نعمت, فروهرمهر, علی, جایدری, امین, نظیفی, نرگس. (1401). 'مهندسی یک پروتئین کایمریک نوترکیب متشکل از آنتیژن OmpL متصل شده به ادجوانت مولکولی HBHA (HBHA-OmpL) با هدف توسعه واکسن بر علیه سالمونلا تیفیموریوم', سامانه مدیریت نشریات علمی, (), pp. -. doi: 10.22092/vj.2022.359453.1995
بازگیر, مرضیه, شمس, نعمت, فروهرمهر, علی, جایدری, امین, نظیفی, نرگس. مهندسی یک پروتئین کایمریک نوترکیب متشکل از آنتیژن OmpL متصل شده به ادجوانت مولکولی HBHA (HBHA-OmpL) با هدف توسعه واکسن بر علیه سالمونلا تیفیموریوم. سامانه مدیریت نشریات علمی, 1401; (): -. doi: 10.22092/vj.2022.359453.1995
مهندسی یک پروتئین کایمریک نوترکیب متشکل از آنتیژن OmpL متصل شده به ادجوانت مولکولی HBHA (HBHA-OmpL) با هدف توسعه واکسن بر علیه سالمونلا تیفیموریوم
1گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه لرستان,، ایران
2گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه لرستان، ایران
3گروه علوم دام، دانشکده کشاورزی، دانشگاه لرستان، ایران
4گروه پاتوبیولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه لرستان، ایران
چکیده
سالمونلا تیفی یک باکتری گرم منفی از خانواده آنترو باکتریاسه است که بعنوان عامل ایجاد کننده بیماری در انسان و دام مطرح میباشد. یکی از جدیدترین راه های مقابله با این بیماری استفاده از واکسنهای نوترکیب است. در این مطالعه، سازهای متشکل از آنتیژن OmpL از باکتری سالمونلا تیفــیموریــوم و پروتئین HBHA به عنوان ادجوانت مولکولی از باکتری مایکوباکتریوم به روش درون رایانه این (in silico) و با استفاده از یک لینکر پپتیدی طراحی شد. بدین منظور توالی نوکلئوتیدی هریک این پروتئینها از پایگاه دادهها استخراج شدند و سازه نوترکیب HBHA- OmpL با بررسی فریم صحیح خوانش طراحی شد. سپس برای ارزیابی امتیاز ایمنیزایی و خواص فیزیکوشیمایی و همچنین ساختارهای دوم و سوم این سازه از سرورهای معتبر آنلاین استفاده شد. بهترین مدل سه بعدی پالایش شده برای فرایند داکینگ مولکولی مورد استفاده قرار گرفت. توالی نکلئوتیدی سازه کایمریک نوترکیب برای بیان در اشریشای کولای بهینه سازی گردد و امکان کلون توالی بهینه شده در وکتور بیانی pET22b(+) بررسی شد. بر اساس نتایج بدست آمده در این مطالعه، سازه کایمریک HBHA- OmpL با وزن مولکولی 45/49 کیلو دالتون دارای شاخص ناپایداری 75/32 و شاخص آنتی ژنسیتی 688/0 بود و ساختارهای مارپیچ آلفا و سیم پیچهای تصادفی بیشترین سهم را در توزیع ساختار دوم این سازه داشتند. بررسی داکینگ پروتئین-پروتئین نتایج نشان داد که پروتئین HBHA علرغم کانژوگه شدن با پروتئین OmpL، توانست از طریق 23 پیوند هیدروژنی به گیرنده TLR4/MD2 متصل شود. نتایج کلونیگ درون رایانه ای نیز نشان داد سازه کایمریک میتواند در وکتور pET22b(+) با موفقیت کلون شود.
Engineering a recombinant chimeric protein consisting of OmpL antigen Conjugated to HBHA molecular adjuvant (HBHA-OmpL) with the aim of developing a vaccine against Salmonella typhimurium
نویسندگان [English]
Marzieh Bazgir1؛ Nemat Shams2؛ Ali Forouharmehr3؛ Amin Jaydari4؛ Narges Nazifi2
1,,Department of Pathobiology,Faculty of Veterinary Medicine, Lorestan University, Iran
2Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Lorestan University, Iran
3Department of Animal Science, Faculty of Agriculture, Lorestan University, Iran
4Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Lorestan University, Iran
چکیده [English]
Salmonella typhi is a zoonosis gram-negative bacterium of the Enterobacteriaceae family. One of the newest solutions to fight with this disease is the use of recombinant vaccines. In this study, a recombinant construct consisting of OmpL antigen from Salmonella Typhimurium and HBHA protein as a molecular adjuvant from Mycobacterium was designed by in silico method and using a linker. For this purpose, sequence of each these protein was extracted from the database and the HBHA-OmpL recombinant construct was designed based on the correct open reading frame. Then, reliable servers were used to evaluate the immunogenicity score, physicochemical properties as well as the secondary and tertiary structures of designed construct. The best tertiary model was used in the molecular docking process. Finally, a codon optimization and an in silico cloning were considered for the nucleotide sequence of the designed vaccine. Based on the results, the HBHA-OmpL chimeric Construct with a molecular weight of 49.45 kDa had an instability index of 32.75 and an antigenicity index of 0.688, and alpha helix and random coil structures had the largest contribution in the secondary structure of this structure. The docking results showed that despite being conjugated with OmpL protein, HBHA molecule was able to connect to TLR4/MD2 receptor through 23 hydrogen bonds. Also, cloning results confirmed that nucleotide sequence of the designed vaccine can be successfully inserted in pET22(+) vector.