3Department of Avian Disease Research and Diagnostic, Razi Vaccine and Serum Research Institute
4Department of Poultry Research and Vaccine Production, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran
5Department of Research and Development, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research Education and Extension Organization (AREEO), Marand, Iran
6Graduate of MSc. of Microbiology, Department of Biology, Faculty of Basic Sciences, Marand Branch of Islamic Azad University, Marand, Iran
چکیده
Knowledge of virus and replication kinetic plays a key role in developing a vaccine. This research intended to monitor the process of replication and determine the best harvesting time of Newcastle disease virus (NDV) V4 vaccine strain in allantoic fluids of specific pathogen-free (SPF)-embryonated chicken eggs (ECEs) by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), hemagglutination (HA), and egg infective dose fifty percent (EID50) tests. For this purpose, the V4 vaccine strain of the virus was intra-allantoically inoculated into 96 10-day-old SPF-ECEs at the rate of 0.1 mL/ECE. The allantoic fluids of inoculated eggs were collected from 6 eggs at 6 h intervals up to 96 hours post-infection (hpi). The harvested suspensions were confirmed to contain NDV by the mentioned serologic and molecular techniques. Based on the results, the virus was first detected at 36 hpi in ECEs by RT-PCR. The peak of HA and EID50 titers in allantoic fluids was started at 42 hpi, and the titers were at the highest level until the end of the experiment. The results indicated that the best virus harvesting time for NDV V4 vaccine strain in ECEs is between 42-60 hpi. These findings pave the way to achieving the adequate and enhancing production rate, immunogenicity, and cost-related parameters in V4 Newcastle vaccine development.
پایش روند رشد و تکثیر سویه واکسینال ویروس بیماری نیوکاسل در تخممرغهای جنیندار به روش واکنش زنجیرهای پلیمراز رونویسی معکوس (RT-PCR)
چکیده [English]
دانش ما در مورد ویروس و کینتیک تکثیر آن نقش کلیدی در بهبود فرایند ساخت واکسن دارد. مطالعه حاضر با هدف پایش روند تکثیر و تعیین مناسبترین زمان استحصال ویروس بیماری نیوکاسل (NDV) در مایعات آلانتوئیک تخممرغهای جنیندار (ECEs) عاری از پاتوژنهای خاص (SPF) با استفاده از روشهای واکنش زنجیرهای پلیمراز رونویسی معکوس (RT-PCR)، هماگلوتیناسیون (HA) و دوز عفونتزایی 50 درصد تخممرغها (EID50) طراحی گردید. به همین منظور، سویه واکسینال V4 ویروس نیوکاسل بهصورت داخل آلانتوئیک به 96 تخممرغ SPF جنیندار 10 روزه (هر کدام 1/0 میلیلیتر) تلقیح شد. مایعات آلانتوئیک گروههای 6 عددی از تخممرغها در فواصل زمانی 6 ساعته و تا ساعت 96 بعد از عفونیشدن (hpi) جمعآوری شدند. محتوای ویروسی تعلیقههای استحصالشده با روشهای مولکولی و سرولوژیک فوقالاشاره مورد بررسی قرارگرفتند. بر اساس نتایج، اولین زمان شناسایی ویروس در تخممرغهای جنیندار با روش RT-PCR ساعت 36 بعد از عفونیشدن بود. عیارهای HA و EID50 مایعات آلانتوئیک از ساعت 42 بعد از عفونیشدن به حداکثر مقدار خود رسیده و تا پایان آزمایش در بالاترین سطح باقیماندند. بر اساس یافتههای این مطالعه، مناسبترین زمان استحصال سویه V4 ویروس بیماری نیوکاسل در تخممرغ-های جنیندار بین ساعات 60-42 بعد از عفونیشدن میباشد. دادههای این پژوهش میتواند اطلاعات ما در مورد عوامل تاثیرگذار بر افزایش میزان تولید، باصرفه نمودن تولید و بهبود ایمنیزایی واکسن سویه V4 ویروس بیماری نیوکاسل را افزایش دهد.