Related Links
ارزیابی مقایسهای پروتئین اصلی بیان شده پاپیلوماویروس تیپ16 در سیستمهای پلاسمید و باکیلوویروس در سلول حشره | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| Article 6, Volume 75, Issue 2, January 0, Pages 187-195 PDF (263.39 K) | ||
| Document Type: مقالات پژوهشی | ||
| DOI: 10.22092/ari.2018.121095.1205 | ||
| Abstract | ||
| بیان پروتئین ماژور (L1) سروتیپ 16 پاپیلوما ویروس در سلول حشره در دو سیستم بیان پلاسمید و باکیلو ویروس مورد بررسی و مطالعه قرار گرفت. پروتئین بیان شده از سلول حشره با استفاده از روش افینیتی (ستونهای نیکل) و سیستم هیستیدین تک خالص سازی شد. بیان پروتئین L1 توسط SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفته و باند مشخص در حدود 58کیلودالتون با درجه بالایی از خلوص(98%) (SDS-PAGE) مشاهده شد. میزان تولید پروتئین نوترکیب L1 در سیستم پلاسمید و باکیلو ویروس (کشت سلول 10 میلی لیتر و تعداد سلول 107) از455 تا 495 میکرو گرم در میلی لیتر و از 1.44 تا 1.60 میلی گرم در میلی لیتر به ترتیب گزارش شده است. آنتی ژنیسیتی پروتئین با استفاده از آزمونهای ایمنوفلورنس و وسترن بلات مورد ارزیابی و با آزمون دات بلات با استفاده از سرم مثبت انسانی و نیز آنتی بادی اختصاصی پروتئین ماژور پاپیلوما ویروس نهایی شد. نتایج این آزمونها نشان داد که این پروتئین واکنش مثبت به آنتی بادیهای اختصاصی ویروس نشان داد. این مطالعه نشان داده که سیستم پلاسمید (InsectDirect) روش خوبی برای بیان سریع و آنالیز سریع پروتئین ماژور پاپیلو ماویروس بوده و سیستم باکیلو ویروس سیستم بسیار خوبی برای بیان موثر تر ذرات شبه ویروسی پاپیلوما ویروس میباشد. | ||
| Keywords | ||
| پاپیلوماویروس; باکیلوویروس; کلونینگ; بیان | ||
|
Supplementary Files
|
||
| References | ||
|
Chang, D., Fung, C.Y., Ou, W.C., Chao, P.C., Li, S.Y., Wang, M., et al., 1997. Self-assembly of the JC virus major capsid protein, VP1, expressed in insect cells. J Gen Virol 78, 1435-1439.
Chang, D., Liou, Z.-M., Ou, W.-C., Wang, K.-Z., Wang, M., Fung, C.-Y., et al., 1996. Production of the antigen and the antibody of the JC virus major capsid protein VP1. J Virol Methods 59, 177-187.
Goldmann, C., Petry, H., Frye, S., Ast, O., Ebitsch, S., Jentsch, K.D., et al., 1999. Molecular cloning and expression of major structural protein VP1 of the human polyomavirus JC virus: formation of virus-like particles useful for immunological and therapeutic studies. J Virol 73, 4465-4469.
Kost, T.A., Condreay, J.P., Jarvis, D.L., 2005. Baculovirus as versatile vectors for protein expression in insect and mammalian cells. Nat Biotechnol 23, 567-575.
Li, T.-C., Takeda, N., Kato, K., Nilsson, J., Xing, L., Haag, L., et al., 2003. Characterization of self-assembled virus-like particles of human polyomavirus BK generated by recombinant baculoviruses. Virol J 311, 115-124.
Luckow, V.A., Summers, M.D., 1988. Trends in the Development of Baculovirus Expression Vectors. Biotechnology 6, 47-55.
Stoscheck, C.M., 1990. [6] Quantitation of protein. In: Deutscher, M.P. (Ed.), Methods in Enzymology, Academic Press, Pp. 50-68.
Viscidi, R.P., Rollison, D.E.M., Viscidi, E., Clayman, B., Rubalcaba, E., Daniel, R., et al., 2003. Serological Cross-Reactivities between Antibodies to Simian Virus 40, BK Virus, and JC Virus Assessed by Virus-Like-Particle-Based Enzyme Immunoassays. Clin Diagn Lab Immunol 10, 278-285. | ||
|
Statistics Article View: 2,006 PDF Download: 2,886 |
||
Journal management system. designed by sinaweb