| تعداد نشریات | 282 |
| تعداد نشریات سازمان | 80 |
| تعداد شماره‌ها | 3,258 |
| تعداد مقالات | 36,030 |
| تعداد مشاهده مقاله | 55,063,904 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 94,084,155 |
A new strategy for the high-yield production of recombinant Clostridium septicum alpha-protoxin: Periplasmic expression in Escherichia coli C43 followed by extracellular release via osmotic shock | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقالات آماده انتشار، پذیرفته شده، انتشار آنلاین از تاریخ 14 شهریور 1405 اصل مقاله (1.06 M) | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.66224/ari.2026.372777.4118 | ||
| نویسندگان | ||
| Majid Esmaelizad* 1؛ Sahar Seyedi2؛ Mojtaba noofeli1؛ Abdolhamid Angaji2؛ Ali Nazari3؛ Afshar Aetemady3؛ siamak khoshnood3؛ Maedeh samianifard3 | ||
| 1Research and Development Department, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Alborz, Iran. | ||
| 2Department of Biology, Faculty of Biological sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran | ||
| 3Research and Development Department, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Alborz, Iran | ||
| چکیده | ||
| Introduction: Given the challenges associated with producing native toxin from Clostridium bacteria, including biosafety risks, impurity and low yield, recombinant expression in hosts such as E. coli has emerged as a safe, pure and cost-effective approach. Materials & Methods: The codon-optimized sequence of the alpha protoxin of Clostridium septicum was synthesized and cloned into the pET22b+ vector for expression in E. coli. The recombinant plasmid was transformed into the E. coli strain C43 via heat shock and induced with 0.2% lactose in 5 liter 2YT media at 22°C. Using the pelB leader signal, the protoxin was expressed in the periplasmic space. Osmotic shock was employed to release the protein extracellularly. The protoxin was purified from the osmotic shock buffer containing the recombinant toxin using nickel resin affinity chromatography. Results: The yield of purification estimated 10.4mg per one liter of bacterial culture. After dialysis, protein concentration was performed using the Bradford assay. The recombinant protoxin was confirmed by Western blotting and specific NIBSC antibody by indirect ELISA. Furthermore, the produced recombinant toxin successfully detected antibodies generated in rabbits immunized with the quadrivalent clostridial vaccine of Razi institute using indirect ELISA assay. Conclusion: This recombinant toxin might be used for the development of recombinant vaccine or as a standard antigen for quality control of the traditional vaccine. | ||
| کلیدواژه‌ها | ||
| recombinant protein؛ Alpha protoxin؛ clostridium septicum؛ periplasmc؛ osmotic shock؛ extracellular release | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| استراتژی جدید برای تولید پرو توکسین نوترکیب آلفای باکتری کلستریدیوم سپتیکوم؛ بیان پری پلاسمیک در ایکولای سویه C43 و آزادسازی برون سلولی با استفاده از شوک اسمزی | ||
| چکیده [English] | ||
| مقدمه: با توجه به چالشهای مرتبط با تولید توکسین بومی از باکتری کلستریدیوم، از جمله خطرات ایمنی زیستی و بازده پایین، بیان نوترکیب در میزبانهایی مانند اشریشیا کلی به عنوان رویکردی ایمن و مقرون به‌صرفه مطرح شده است. مواد و روشها: توالی بهینه‌شده از نظر کدون پروتوکسین آلفای باکتری کلستریدیوم سپتیکوم برای بیان در اشریشیا کلی سنتز و در وکتور pET22b+ همسانه‌سازی شد. پلاسمید نوترکیب با استفاده از شوک حرارتی به سویه C43 اشریشیا کلی منتقل و با لاکتوز 0.2 درصد در محیط 2YT با حجم ۵ لیتر و دمای ۲۲ درجه سانتی‌گراد القا شد. با استفاده از توالی سیگنال pelB ، پروتوکسین در فضای پری‌پلاسمی بیان گردید. برای آزادسازی پروتئین در محیط برون‌سلولی، از شوک اسمزی استفاده شد. پروتوکسین از بافر شوک اسمزی حاوی توکسین نوترکیب، با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی با رزین نیکل خالص‌سازی گردید. نتایج: بازده خالص‌سازی 10.4 میلی‌گرم به ازای هر لیتر کشت باکتریایی برآورد شد. پس از دیالیز، غلظت پروتئین با استفاده از روش برادفورد اندازه‌گیری شد. توکسین نوترکیب با روش وسترن بلات و آنتی‌بادی استاندارد NIBSC با استفاده از الایزای غیرمستقیم تأیید گردید. علاوه بر این، توکسین نوترکیب تولید شده با موفقیت قادر به شناسایی آنتی بادی های تولید شده در خرگوش‌های ایمن شده با واکسن چهارظرفیتی کلستریدیایی مؤسسه رازی، با استفاده از روش الایزای غیرمستقیم بود. نتیجه گیری: این توکسین نوترکیب می‌تواند برای تولید واکسن نوترکیب یا به‌عنوان آنتی‌ژن استاندارد برای کنترل کیفی واکسن سنتی مورد استفاده قرار گیرد. | ||
| کلیدواژه‌ها [English] | ||
| پروتئین نوترکیب, آلفا پروتوکسین, کلستریدیوم سپتیکوم, پری پلاسمیک, شوک اسمزی, ترشح خارج سلولی | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 126 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 72 |
||