Habibi, Gholamreza, Afshari, Asghar, Fathi, Saeed, Karimi, Gholamreza, Shahedi, Amin. (1405). Development and Evaluation of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the Diagnosis of Babesia ovis Infection in Sheep. سامانه مدیریت نشریات علمی, (), -. doi: 10.66224/ari.2026.372293.4060
Gholamreza Habibi; Asghar Afshari; Saeed Fathi; Gholamreza Karimi; Amin Shahedi. "Development and Evaluation of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the Diagnosis of Babesia ovis Infection in Sheep". سامانه مدیریت نشریات علمی, , , 1405, -. doi: 10.66224/ari.2026.372293.4060
Habibi, Gholamreza, Afshari, Asghar, Fathi, Saeed, Karimi, Gholamreza, Shahedi, Amin. (1405). 'Development and Evaluation of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the Diagnosis of Babesia ovis Infection in Sheep', سامانه مدیریت نشریات علمی, (), pp. -. doi: 10.66224/ari.2026.372293.4060
Habibi, Gholamreza, Afshari, Asghar, Fathi, Saeed, Karimi, Gholamreza, Shahedi, Amin. Development and Evaluation of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the Diagnosis of Babesia ovis Infection in Sheep. سامانه مدیریت نشریات علمی, 1405; (): -. doi: 10.66224/ari.2026.372293.4060
Development and Evaluation of an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the Diagnosis of Babesia ovis Infection in Sheep
1Department, Razi Vaccine and Serum Research Institute
2Parasite vaccine Research and production Department of Razi institute
3Parasitology Department of Razi institute
چکیده
Background: Babesiosis causes significant economic losses in tropical regions like Iran. While microscopy misses subclinical carriers and PCR is costly for routine use, crude antigen ELISA offers a practical, affordable alternative for resource-limited laboratories. Objectives: This study aimed to develop and optimize an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (iELISA) for Babesia ovis using crude antigens. We also monitored the temporal correlation between parasitemia and serological responses in an experimentally infected sheep. Methods: Crude B. ovis antigen was prepared from infected sheep erythrocytes. The iELISA was optimized via checkerboard titration (antigen: 2 µg/mL; serum dilution: 1:100; HRP-conjugated anti-sheep IgG: 1:25,000). Diagnostic performance was evaluated using 20 positive and 32 confirmed negative sera. A healthy lamb was experimentally infected with cryopreserved B. ovis-infected blood. Monthly sampling included EDTA blood for PCR, serum for iELISA, and Giemsa-stained smears. Results: The iELISA demonstrated 85% sensitivity, 84% specificity, 85% accuracy, 77% positive predictive value (PPV), and 90% negative predictive value (NPV). In the infected lamb, fever and acute parasitemia appeared on day 10 post-infection and resolved after imidocarb treatment. On day 12, microscopy, PCR, and iELISA were positive. During the carrier phase, microscopy was negative, while PCR and iELISA remained positive. By day 270, both microscopy and PCR were negative, but iELISA remained positive, indicating a persistent humoral immune response. Conclusion: The developed crude antigen-based iELISA serves as a cost-effective tool for initial serological screening of B. ovis in sheep. With a high NPV (90.0%), it is particularly effective for screening, with PCR reserved for confirmation.
توسعه و ارزیابی آزمون الایزا (ELISA) برای تشخیص عفونت Babesia ovis در گوسفند
نویسندگان [English]
غلامرضا حبیبی1؛
1هیئت علمی بخش تولید واکسن های انگلی
چکیده [English]
پیشزمینه و اهداف: بابزیوز خسارات سنگینی در مناطق گرمسیری دارد. روش میکروسکوپی ناقلین تحتبالینی را تشخیص نمیدهد و روش PCR پرهزینه است، این مطالعه با هدف توسعه آزمون iELISA مقرونبهصرفه بر پایه آنتیژن خام بابزیا اویس انجام شد. هدف دیگر، پایش ارتباط زمانی پارازیتمی و پاسخهای سرولوژیک در گوسفند آلوده شده بود. روشها: آنتیژن خام از گلبولهای قرمز آلوده تهیه و از طریق تیتراسیون چکربورد بهینهسازی شد (آنتیژن: 2μg/ml ؛ رقت سرم: 1:100؛ کنژوگه: 1:25,000). عملکرد تشخیصی با استفاده از 20 سرم مثبت و 32 سرم منفی ارزیابی گردید. سپس، یک بره سالم به صورت تجربی آلوده و ماهانه با PCR، iELISA و گسترش خونی گیمسا پایش گردید. نتایج: آزمون iELISA حساسیت 85%، ویژگی 84%، دقت 85%، ارزش اخباری مثبت (PPV) برابر با 77% و ارزش اخباری منفی (NPV) برابر با 90% بود. در بره آلوده، تب و پارازیتمی حاد در روز 10 بروز کرد و با ایمیدوکارب درمان شد. روز 12، نتایج میکروسکوپی، PCR و iELISA مثبت بودند. در فاز ناقل، تنها نتیجه میکروسکوپی منفی شد. تا روز 270، تستهای میکروسکوپی و PCR منفی شدند، اما مثبت ماندن iELISA تداوم پاسخ ایمنی هومورال پایدار را نشان داد. نتیجهگیری: آزمون iELISA مبتنی بر آنتیژن خام، ابزاری مقرونبهصرفه و کارآمد برای غربالگری اولیه بابزیا اویس در گوسفندان است. به دلیل ارزش اخباری منفی بالای این آزمون (90%)، میتوان از آن به خوبی برای غربالگری استفاده کرد و آزمون دقیقتر PCR را تنها برای تأیید نهایی نتایج به کار برد.