Ziafati Kafi, Zahra, Ghorani, Mohammad Reza, Ghalyanchilangeroudi, Arash, Sarmadi, Soroush. (1405). Designing a new primer based on the E gene for more accurate molecular detection of avian infectious bronchitis virus. سامانه مدیریت نشریات علمی, (), -. doi: 10.22092/ari.2026.370509.3815
Zahra Ziafati Kafi; Mohammad Reza Ghorani; Arash Ghalyanchilangeroudi; Soroush Sarmadi. "Designing a new primer based on the E gene for more accurate molecular detection of avian infectious bronchitis virus". سامانه مدیریت نشریات علمی, , , 1405, -. doi: 10.22092/ari.2026.370509.3815
Ziafati Kafi, Zahra, Ghorani, Mohammad Reza, Ghalyanchilangeroudi, Arash, Sarmadi, Soroush. (1405). 'Designing a new primer based on the E gene for more accurate molecular detection of avian infectious bronchitis virus', سامانه مدیریت نشریات علمی, (), pp. -. doi: 10.22092/ari.2026.370509.3815
Ziafati Kafi, Zahra, Ghorani, Mohammad Reza, Ghalyanchilangeroudi, Arash, Sarmadi, Soroush. Designing a new primer based on the E gene for more accurate molecular detection of avian infectious bronchitis virus. سامانه مدیریت نشریات علمی, 1405; (): -. doi: 10.22092/ari.2026.370509.3815
Designing a new primer based on the E gene for more accurate molecular detection of avian infectious bronchitis virus
1Department of Microbiology and Immunology, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tehran, Tehran, Iran
2Department of Pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tabriz, Tabriz, Iran
چکیده
Background: Infectious bronchitis (IB) is a highly contagious disease of chickens caused by the infectious bronchitis virus (IBV), affecting the respiratory and urogenital systems and leading to significant economic losses due to decreased egg quality and increased susceptibility to secondary infections. Early and reliable molecular diagnosis of IBV is essential for effective disease control. Although conserved genomic regions such as the N gene and untranslated regions (UTRs) are commonly targeted in diagnostic assays, alternative conserved targets may improve detection performance. Materials and Methods: In this study, a novel primer targeting a conserved region of the E gene of the IBV genome was designed to amplify a 147-bp fragment. Its performance was compared with a previously reported N-gene-based primer. Equal concentrations of viral RNA from four IBV strains (Ma5, Variant 2, QX, and 793/B) were extracted and subjected to RT-PCR using both E- and N-gene primers. Three RNA concentrations (undiluted, 1:10, and 1:100 dilutions) were evaluated to assess detection sensitivity. Results: RT-PCR results showed that the E-gene primer successfully detected QX and Ma5 strains at all three concentrations (undiluted, 1:10, and 1:100). The 793/B strain was detected at undiluted and 1:10 dilutions, while Variant 2 was weakly detected only in the undiluted sample. In contrast, the N-gene primer weakly detected only the 793/B strain at undiluted and 1:10 dilutions and failed to detect the other strains at any concentration. Conclusion: The newly designed E-gene primer demonstrated superior detection performance compared to the previously used N-gene primer. Targeting conserved regions of the IBV genome, such as the E gene, may enhance the sensitivity and reliability of molecular diagnostic assays. Further optimization and validation studies are recommended to improve IBV detection strategies.
طراحی یک پرایمر جدید بر اساس ژن E برای تشخیص مولکولی دقیقتر ویروس برونشیت عفونی پرندگان
چکیده [English]
زمینه مطالعه: برونشیت عفونی (IB) یک بیماری بسیار واگیردار در طیور است که توسط ویروس برونشیت عفونی (IBV) ایجاد میشود و دستگاههای تنفسی و ادراری-تناسلی را درگیر میکند. این بیماری با کاهش کیفیت تخممرغ و افزایش حساسیت به عفونتهای ثانویه، موجب خسارات اقتصادی قابلتوجهی میشود. تشخیص مولکولی سریع و قابلاعتماد IBV برای کنترل مؤثر بیماری ضروری است. اگرچه در آزمونهای تشخیصی معمولاً نواحی ژنومی محافظتشدهای مانند ژن N و نواحی غیرترجمهشونده (UTRs) هدف قرار میگیرند، استفاده از سایر نواحی محافظتشده ممکن است عملکرد تشخیصی را بهبود بخشد. موارد و روش کار: در این مطالعه، یک جفت پرایمر جدید با هدف ناحیهای محافظتشده از ژن E ژنوم IBV طراحی شد که قطعهای به طول ۱۴۷ جفتباز را تکثیر میکند. عملکرد این پرایمر با یک پرایمر مبتنی بر ژن N که پیشتر گزارش شده بود مقایسه گردید. غلظتهای مساوی RNA ویروسی از چهار سویه IBV شامل Ma5، Variant 2، QX و 793/B استخراج و با استفاده از هر دو پرایمر ژن E و ژن N تحت آزمون RT-PCR قرار گرفتند. بهمنظور ارزیابی حساسیت تشخیص، سه غلظت RNA شامل نمونه رقیق نشده، رقت ۱:۱۰ و ۱:۱۰۰ مورد بررسی قرار گرفت. نتایج: نتایج RT-PCR نشان داد که پرایمر ژن E سویههای QX و Ma5 را در هر سه غلظت (بدون رقت، ۱:۱۰ و ۱:۱۰۰) با موفقیت شناسایی کرد. سویه 793/B در نمونهی رقیق نشده و غلظت ۱:۱۰ شناسایی شد، در حالیکه سویه Variant 2 تنها در نمونه رقیق نشده بهصورت ضعیف تشخیص داده شد. در مقابل، پرایمر ژن N تنها توانست سویه 793/B را در نمونهی رقیق نشده و غلظت۱:۱۰ بهصورت ضعیف شناسایی کند و موفق به شناسایی سایر سویهها در هیچیک از غلظتها نشد. نتیجه گیری: پرایمر جدید طراحیشده بر پایه ژن E در مقایسه با پرایمر مبتنی بر ژن N که پیشتر مورد استفاده قرار میگرفت، عملکرد تشخیصی بهتری نشان داد. هدفگیری نواحی محافظتشده ژنوم IBV، مانند ژن E، میتواند حساسیت و قابلیت اطمینان آزمونهای تشخیص مولکولی را افزایش دهد. انجام مطالعات بیشتر بهمنظور بهینهسازی و اعتبارسنجی این پرایمرها برای بهبود راهبردهای تشخیص IBV توصیه میشود.
کلیدواژهها [English]
ویروس برونشیت عفونی, ایران, RT-PCR, پرایمر
آمار
تعداد مشاهده مقاله: 3
تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 5
سامانه مدیریت نشریات علمی. طراحی و پیاده سازی از سیناوب