2Razi Vaccine and Serum Research Institute (RVSRI), Agricultural Research, Education, and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran
3Islamic Azad University, Karaj Branch (KIAU), Karaj, Alborz, Iran
چکیده
Introduction: The major histocompatibility complex (MHC) in large animals, known as Ovine Leukocyte Antigen (OLA) in sheep, is crucial for understanding genetic diversity, disease susceptibility, reproductive traits, and vaccine responsiveness. This sequenced OLA-DRB gene Fashandi sheep breeds to explore their role in disease resistance and vaccine response. Method and material:Fifty blood samples were collected from Fashandi breed using EDTA tubes. Forty samples were stored at −20°C for DNA extraction using the i-genomic Blood DNA Extraction Mini Kit. Amplified PCR products were electrophoresed and sequenced. BLASTn (NCBI) was used for sequence identification. DRB sequences were aligned and compared with reference sequences from the Immuno Poly morphism Database (IPD) using BioEdit software. Allelic/genotypic frequencies were determined via direct counting, and genetic diversity metrics (homozygosity, heterozygosity, allele number) were calculated using Levene’s test and Nei’s formulas via PopGene 1.32 and GenAleXA. For bioinformatics, sequences were aligned with ClustalX and analyzed using BioEdit and CLC Sequence Viewer. Shannon entropy measured amino acid variability, and phylogenetic trees were constructed with MEGA5.3 using neighbor joining. Results: Eight Ovar-DRB1 exon 2 alleles were identified: *08, *19, *07, *24, *30, *16, *03, and *14. The most frequent were *08 (30%) and *07 (25%), while *30 and *03 were least common (5%). The predominant genotypes were *08/*08 and *07/*07 (each 20%). Homozygosity and heterozygosity were equal at 50%. Discussion: The presence of multiple alleles suggests genetic diversity influencing disease susceptibility and resistance and also vaccine response in Iranian Fashandi sheep breeds. Understanding these genetic markers can guide better breeding, vaccination and disease management strategies.
ژنوتایپینگ ژن OLA-DRB1 در گوسفندان فشندی برای تدوین راهبردهای مؤثر در واکسیناسیون و مدیریت بیماریها
چکیده [English]
مقدمه: مجموعه سازگاری بافتی اصلی (MHC) در حیوانات بزرگ، که در گوسفندان با نام آنتیژن لکوسیتی گوسفند (Ovine Leukocyte Antigen - OLA) شناخته میشود، نقشی اساسی در درک تنوع ژنتیکی، حساسیت به بیماریها، صفات تولیدمثلی و پاسخ به واکسن ها دارد. در این پژوهش، ژن OLA DRB در نژاد گوسفندان فشندی ایران تعیین توالی شدند تا نقش آنها در مقاومت به بیماری و پاسخ ایمنی به واکسن بررسی شود. مواد و روش کار: از نژاد فشندی ۵۰ نمونه خون در لولههای حاوی EDTA جمعآوری شد. از میان آنها، ۴۰ نمونه در دمای °C−۲۰ برای استخراج DNA با استفاده از کیت i genomic Blood DNA Extraction Mini Kit نگهداری شدند. محصولات PCR پس از تکثیر، الکتروفورز و تعیین توالی شدند. برای شناسایی توالیها از ابزار BLASTn (پایگاه NCBI) استفاده شد. توالیهای ژن DRB همتراز شده و با توالیهای مرجع در پایگاه Immuno Polymorphism Database) IPD) توسط نرمافزار BioEdit مقایسه گردیدند. فرکانسهای آللی و ژنوتیپی با شمارش مستقیم تعیین شدند و شاخصهای تنوع ژنتیکی (هموزیگوتی، هتروزیگوتی، تعداد آللها) با استفاده از آزمون لِوِن و فرمولهای نِی از طریق نرمافزارهای PopGene 1.32 و GenAleXA محاسبه شدند. در بخش بیوانفورماتیک، توالیها با نرمافزار ClustalX همتراز و با BioEdit و CLC Sequence Viewer تحلیل شدند. آنتروپی شانون برای اندازهگیری تنوع آمینواسیدی استفاده شد و درختهای فیلوژنتیکی با نرمافزار MEGA 5.3 به روش Neighbor Joining ساخته شدند. نتایج: در مجموع، هشت آلل از ژن Ovar DRB1 در اگزون ۲ شناسایی شد: *08، *19، *07، *24، *30، *16، *03 و *14. بیشترین فراوانی مربوط به 08 (۳۰٪) و 07 (۲۵٪) بود، در حالی که آللهای 30 و 03 کمترین شیوع را داشتند (هرکدام ۵٪). شایعترین ژنوتیپها *08/08 و 07/*07 بودند (هرکدام ۲۰٪). نسبت هموزیگوتی و هتروزیگوتی برابر و برابر با ۵۰٪ برآورد شد. بحث: وجود چندین آلل مختلف نشاندهندهی تنوع ژنتیکی قابلتوجهی است که میتواند بر حساسیت و مقاومت به بیماریها و همچنین پاسخ به واکسن در نژاد گوسفندان فشندی ایرانی تأثیرگذار باشد. شناخت این نشانگرهای ژنتیکی میتواند به طراحی راهبردهای مؤثرتر در پرورش، واکسیناسیون و مدیریت بیماریها کمک کند.
کلیدواژهها [English]
OLA DRB1, ژنوتاپینگ, گوسفند فشندی, PCR, تعیین توالی
آمار
تعداد مشاهده مقاله: 3
تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 5
سامانه مدیریت نشریات علمی. طراحی و پیاده سازی از سیناوب