| تعداد نشریات | 285 |
| تعداد نشریات سازمان | 83 |
| تعداد شمارهها | 3,094 |
| تعداد مقالات | 34,531 |
| تعداد مشاهده مقاله | 49,376,348 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 79,824,833 |
Cloning and Expression of a cDNA Encoding Phosphoribosyltransferase Type I From Strongyloides ratti | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقاله 6، دوره 80، شماره 5، آذر و دی 2025، صفحه 1129-1136 اصل مقاله (1.48 M) | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.32598/ARI.80.5.3516 | ||
| نویسنده | ||
| Abbas Jolodar* | ||
| Biochemistry and Molecular Biology Section, Department of Basic Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Shahid Chamran University of Ahvaz, Ahvaz, Iran. | ||
| چکیده | ||
| Introduction: Strongyloides ratti is closely related to the human parasite Strongyloides stercoralis and is commonly used as a laboratory model for studying and diagnosing strongyloidiasis in humans. The enzyme phosphoribosyltransferase (PRTase) type I of S. ratti is an important enzyme involved in the salvage of purine nucleotides. Materials & Methods: Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) amplification of 567 bp cDNA fragment encoding the middle part of a PRTase from S. ratti was carried out using two specific primers. The use of this fragment as a probe allowed the isolation of a larger cDNA sequence through searching the expressed sequence tag (EST) database. Results: The entire size of the assembled fragment was 789 bp. The deduced amino acid sequence exhibits a high degree of homology (98.6%) with the only sequence of S. ratti. The S. ratti phosphoribosyltransferase (SrPRT) sequence had the lowest genetic distance with the only S. ratti partial mRNA sequence XM_024650090.1 (1.6%). Multiple alignment of SrPRT showed that the stretches of amino acid homology correspond to two putative substrate-binding domains for purine and phosphoribosyl diphosphate (PRPP). In the C-terminus part of the protein, there is also a putative binding domain sequence with high homology. A 642 bp fragment of the SrPRT, including the entire coding sequence corresponding to Met-1 to Lys-214 was expressed into an N-terminal 6His-tagPCRT7/NT-TOPO expression vector in Escherichia coli. A band of 30.5 kDa was observed in the IPTG-induced sample compared to the control on SDS-PAGE. Protein expression was confirmed by Western blot analysis using an anti-His HRP-conjugated antibody. Conclusion: The successful cloning and expression of PRTase from S. ratti allow us to compare this enzyme with other related proteins. Such knowledge may be valuable for future structure-based drug design strategies using this enzyme as a model system for S. stercoralis. | ||
| کلیدواژهها | ||
| Expression؛ Phosphoribosyltransferase (PRTase) type I؛ Purine salvage؛ Strongyloides ratti | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| همسانه سازی و بیان یک cDNA کد کننده فسفریبوزیل ترانسفراز نوع I از Strongyloides ratti | ||
| چکیده [English] | ||
| Strongyloides ratti ارتباط نزدیکی با انگل انسانی S. stercoralis دارد و معمولاً به عنوان مدل آزمایشگاهی برای تشخیص استرونژیلوئیداز در انسان استفاده می شود. آنزیم فسفریبوزیل ترانسفراز نوع 1 (PRTase)این انگل آنزیم مهمی است که در بازیافت نوکلئوتیدهای پورین نقش دارد. تزاید یک cDNA 567 جفت بازی با کمک RT-PCR مربوط به قسمت کد کننده میانی یک PRTase از S. ratti با استفاده از دو پرایمر اختصاصی انجام شد. استفاده از این قطعه به عنوان یک جستجوگر، امکان شناسایی توالی های بزرگتر را از طریق جستجو در پایگاه داده های EST فراهم کرد. اندازه کل قطعه مونتاژ شده 789 جفت باز بود. توالی اسید آمینه های قطعه جدا شده، درجه بالایی از همسانی (98.6٪) را با تنها توالی S. ratti نشان داد. توالی SrPRT کمترین فاصله ژنتیکی با تنها توالی mRNA ناکامل موجود در بانک ژن از S. ratti (XM_024650090.1) (1.6%) آشکار نمود. هم ترازی چندگانه SrPRT مشابهت اسید آمینه های مربوط به دو ناحیه اتصال سوبسترای پورین و PRPP را نشان داد. در قسمت C ترمینال پروتئین، یک توالی حفاظت شده برای اتصال به سوبسترا با همسانی بالا مشاهده شد. یک قطعه 642 جفت بازی SrPRT شامل همه قسمت کد کننده شامل Met-1 تا Lys-214 در وکتور بیانی PCRT7/NT-TOPO در اشریشیا کلی همسانه سازی و بیان گردید. باند 5/30 کیلو دالتونی در نمونه القا شده با IPTG در مقایسه با نمونه شاهد بر روی SDS-PAGE مشاهده گردید. بیان پروتئین با استفاده از آزمایش وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی کونژوگه anti-His HRP مورد تایید واقع شد. همسانه سازی و بیان موفقیت آمیز PRTase از S. ratti به ما اجازه می دهد که این آنزیم را با سایر پروتئین های مربوطه مقایسه کنیم. چنین دانشی ممکن است در آینده برای بکارگیری استراتژی طراحی دارو مبتنی بر ساختار پروتئین، در سیستم مدل برای استفاده در S. stercoralis ارزشمند باشد. | ||
| کلیدواژهها [English] | ||
| فسفوریبوزیل ترانسفراز نوع 1, Strongyloides ratti, بیان پروتئین, بازیافت پورین | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 223 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 109 |
||