| تعداد نشریات | 287 |
| تعداد نشریات سازمان | 85 |
| تعداد شمارهها | 3,159 |
| تعداد مقالات | 35,108 |
| تعداد مشاهده مقاله | 50,532,815 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 90,481,138 |
Cloning, Expression and Functionality Evaluation of Recombinant Monoclonal Antibody Against VP1 Capsid Protein of FMD Virus | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقاله 17، دوره 81، شماره 1، فروردین و اردیبهشت 2026، صفحه 147-156 اصل مقاله (1.31 M) | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.32598/ARI.81.1.3491 | ||
| نویسندگان | ||
| Mozhgan Helalinasab1؛ Mohammad Mehdi Ranjbar* 2؛ Hadi Pourtaghi3؛ Mohammad Kazem Shahkarami2 | ||
| 1Department of Pathobiology, SR.C., Islamic Azad University, Tehran, Iran. | ||
| 2Department of Human Viral Vaccines, Razi Vaccine and Serum Research Institute (RVSRI), Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran. | ||
| 3Department of Microbiology, Ka.C., Islamic Azad University, Karaj, Iran. | ||
| چکیده | ||
| Introduction: Foot-and-mouth disease (FMD) is a highly contagious viral disease caused by the FMD virus (FMDV), which belongs to the Aphthovirus genus in the Picornaviridae family. FMDV is a highly variable RNA virus, and there is limited cross-protection between serotypes and strains. The disease can have devastating economic, social, and environmental impacts. The FMDV capsid is composed of VP1-VP4 structural proteins, with VP1 being the most abundant protein consisting of 213 amino acids. The G-H loop (residues 141-160) of the VP1 capsid protein is highly variable and serves as the main antigenic region. It contains a conserved triplet of amino acids, Arg-Gly-Asp (RGD), which induces the production of protective antibodies against various FMDV types. Monoclonal antibodies (mAbs) play a crucial role in detecting and serotyping FMDV in pathological samples, as well as evaluating protection post-vaccination against FMD. Materials & Methods: This study explores the expression and function of an engineered recombinant single-chain variable fragment (scFv-mAb) in Escherichia coli BL21 (DE3) Rosetta strain as a cost-effective prokaryotic system with high yield. The scFv-mAb gene was inserted into the pET28a (+) expression plasmid. E. coli cells were transformed with the plasmid, induced with 0.5 mM IPTG, and incubated at 37 ˚C for 12 hours. The protein was purified using a Ni2+-NTA resin column and analyzed by 12% SDS-PAGE for quality assessment. The efficiency and functionality of the scFv-mAb were confirmed using an indirect sandwich (capture) enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results: The purified scFv-mAb concentration was determined to be approximately 2.00 mg/mL using the Bradford assay under optimal conditions. Each well was coated with 400 ng of scFv-mAb based on checkerboard results and the mean of negative serum at a 1:10 dilution. The indirect sandwich ELISA assay yielded an optical density (OD) signal range of 0.3 to 1.5 at a 450 nm wavelength in different positive control treatments. Conclusion: The ELISA results showed that the scFv-mAb fragment successfully detected serotype O of FMDV. Further research could confirm the potential of this recombinant antibody for broader commercial applications in the future. | ||
| کلیدواژهها | ||
| Foot-and-mouth disease (FMD)؛ G- H loop؛ VP1؛ Recombinant scFv-mAb؛ Indirect sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| کلونینگ، بیان و ارزیابی عملکرد آنتی بادی مونوکلونال نوترکیب علیه پروتئین کپسید VP1 ویروس FMD | ||
| چکیده [English] | ||
| بیماری تب برفکی (FMD) یکی از مسری ترین بیماری های ویروسی با اثرات بالقوه مخرب اقتصادی، اجتماعی و زیستی است که توسط ویروسی از جنس آفتوویروس، خانواده Picornaviridae ایجاد می شود. ویروس FMD (FMDV) یک ویروس RNA بسیار متغییر است و بین سروتیپها و حتی ساب تایپ های هر سروتایپ، حفاظت متقاطع کمی وجود داشته یا اصلاً وجود ندارد. آنتی بادی مونوکلونال (Mab) نقش مهمی در شناسایی و تعیین سروتیپ FMDV در نمونه های پاتولوژیک و همچنین ارزیابی محافظت در برابر FMD پس از واکسیناسیون را دارد. این مطالعه بیان و عملکرد یک قطعه متغیر تک زنجیره ای نوترکیب مهندسی شده (ScFv-Mab) در سویه روزتا اشریشیا کلی (E.coli) BL21 (DE3) را بررسی می کند. تولید Mab نوترکیب در برابر FMDV در سیستم پروکاریوتی مقرون به صرفه، ساده و با عملکرد بالا است که می تواند پیچیدگی های تولید را کاهش دهد. ژن ScFv-Mab طراحی شده در پلاسمید بیان pET28a (+) سفارش داده شد. پروتئین بیان شده با استفاده از ستون رزین Ni2+-NTA خالصسازی شد و کیفیت آن با 12% SDS-PAGE ارزیابی شد. در نهایت، کارایی و عملکرد ScFv-Mab با روش الایزای غیرمستقیم ساندویچ (گرفتن) تایید شد. سویه روزتا E. coli BL21 (DE3) ترنسفورشده، با 0.5 میلی مولار IPTG القا شد و به مدت 12 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه شد. پروتئین قابل توجهی در هر دو بخش محلول و نامحلول با خلوص بیش از 90٪ بیان شد. غلظت ScFv-Mab خالص شده در شرایط بهینه تقریباً 2 میلی گرم بر میلی لیتر با روش برادفورد محاسبه شد. با آنالیز میانگین سرم منفی و چکربوردها در رقت 1:10، 400 نانوگرم ScFv-Mab در هر چاهک پوشش داده شد. در نهایت چگالی نوری (OD) 0.3 به عنوان برش در روش Sandwich ELISA غیر مستقیم انتخاب شد. نتایج ELISA نشان داد که قطعه ScFv-Mab با موفقیت سروتیپ O - FMDV را با سیگنالهای در محدوده بالاتر یا مساوی 0.3 و کمتر یا مساوی 1.5 در طول موج 450 نانومتر در تیمارهای مختلف کنترل مثبت شناسایی کرد. | ||
| کلیدواژهها [English] | ||
| FMDV, لوپ G-H, VP1, ScFv-Mab نوترکیب, الایزای ساندویچ غیرمستقیم | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 786 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 362 |
||