| تعداد نشریات | 287 |
| تعداد نشریات سازمان | 85 |
| تعداد شمارهها | 3,159 |
| تعداد مقالات | 35,108 |
| تعداد مشاهده مقاله | 50,527,074 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 90,476,677 |
Molecular Identification of Mycoplasma agalactiae in Iran Based on P30 Gene | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقاله 9، دوره 76، شماره 1، خرداد 2021، صفحه 61-68 اصل مقاله (311.52 K) | ||
| نوع مقاله: Original Articles | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.22092/ari.2020.115005.1141 | ||
| نویسندگان | ||
| M Babazadeh1؛ S. A Pourbakhsh* 2؛ Z Noormohammadi1؛ M Esmaelizad3؛ H Goudarzi2 | ||
| 1Department of Biology, Science and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran | ||
| 2Mycoplasma Reference Laboratory, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran | ||
| 3Central Laboratory Department, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran | ||
| چکیده | ||
| Mycoplasma agalactiae (M. agalactiae) is known as the main etiological agent of contagious agalactia (CA). The CA is a disease affecting dairy sheep and goats, the main characteristics of which include keratoconjunctivitis, arthritis, and mastitis. This pathogen results in milk production reduction and suppression, thereby leading to serious economic loss. In the present study, 125 sheep and goat samples were collected from 15 provinces of Iran. Cultural and molecular methods were used for sample characterization. After extracting genomic DNAs using the phenol/chloroform method, the PCR technique was employed to detect Mycoplasma genus in 163bp fragment of 16S rRNA gene (M-PCR) and M. agalactiae in 800bp fragment of conserve and specific P30 lipoprotein gene (P30-PCR) in cultural and clinical samples. Finally, to validate the experimental approach, a 375 bp amplicon of P80 lipoprotein was amplified using the MA-PCR. Out of 125 samples under investigation, 43 cases were positive, and Mycoplasma colonies were observed in the pleuropneumonia-like organisms agar culture. Based on the results of the M-PCR method, 61 specimens (out of 125 samples) were scored positive for Mycoplasma presence. Furthermore, 20 samples were positive according to the P30-PCR data. It should be mentioned that the MA-PCR was performed based on the P80 gene on 125 total samples to furtherverify the results for M.agalactiae detection. Based on the obtained data, P30 and P80 genes were presented and amplified in all Iranian M. agalactiae isolates (n=20). Our results indicated that the P30 gene was conserved and specific to all Iranian M. agalactiae isolates and this new P30-PCR method (as an MA-PCR technique) might be useful in the detection of this pathogen. | ||
| کلیدواژهها | ||
| Contagious agalactia؛ Culture؛ Mycoplasma agalactiae؛ PCR؛ P30 gene | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| شناسایی مولکولی مایکوپلاسما آگالاکتیه در ایران بر اساس ژن P30 مائده بابازاده، سید علی پوربخش، زهرا نورمحمدی، مجید اسمعیلی زاد، حسین گودرزی | ||
| چکیده [English] | ||
| مایکوپلاسما آگالاکتیه عامل اصلی بیماری آگالاکسی واگیر دار در گوسفند و بز است که با علائمی از جمله ورم غدد پستانی، مفاصل و ملتحمه شناسایی می شود. این پاتوژن به عنوان عامل اصلی کاهش و حتی قطع شیر شناسایی شده و در نتیجه خسارات اقتصادی جدی به بار می آورد. در این مطالعه 125 نمونه از گوسفندان و بزهای مشکوک به بیماری از 15 استان کشور جمع آوری و جهت شناسایی نمونه ها از روش کشت و بررسی های مولکولی استفاده شد. DNAی ژنومی به روش فنل-کلروفرم تخلیص و تست PCR برای شناسایی جنس و گونه مایکوپلاسما آگالاکتیه انجام شد. جهت شناسایی جنس مایکوپلاسما از آغازگرهای مربوط به ژن 16SrRNA با محصول PCR به طول 160 جفت باز تکثیر شد. جهت شناسایی گونه، ژن پایدار و اختصاصی P30 به طول 800 جفت باز به کمک آغازگرهای اختصاصی P30 در مایکوپلاسما آگالاکتیه مورد شناسایی قرار گرفت و در نهایت جهت تایید به تکثیر ژن P80 با قطعاتی به طول 375 جفت باز پرداخته شد. در روش تشخیصی کشت، 43 نمونه از 125 نمونه مثبت شده و در محیط PPLO آگار تشکیل کلنی مایکوپلاسما دادند. در روش PCR، در 61 نمونه ژن 16srRNA تکثیر و جنس مایکوپلاسما در این نمونه ها تایید شد. در مرحله بعد در 20 نمونه با تکثیر ژن مربوط به پروتئین اختصاصی P30 گونه مایکوپلاسما آگالاکتیه تایید و در مرحله آخر ژن مربوط به لیپوپروتئین P80 نیز دقیقا در همان 20 نمونه (از مجموع 125 نمونه) شناسایی شد. نتایج حاصل از این تحقیق نشان می دهد که روش P30-PCR جهت شناسایی گونه مایکوپلاسما آگالاکتیه جایگزین مناسبی برای روش های قبلی محسوب شده و به عنوان یک روش قابل اعتماد و موفقیت آمیز جهت تایید گونه آگالاکتیه معرفی می شود. | ||
| کلیدواژهها [English] | ||
| مایکوپلاسما آگالاکتیه, آگالاکسی واگیردار, کشت, PCR, ژن P30 | ||
|
سایر فایل های مرتبط با مقاله
|
||
| مراجع | ||
|
Amores, J., Corrales, J.C., Martín, Á.G., Sánchez, A., Contreras, A., de la Fe, C.J.V.M., 2010. Comparison of culture and PCR to detect Mycoplasma agalactiae and Mycoplasma mycoides subsp. capri in ear swabs taken from goats. Pakistan Vet J 140, 105-108.
Ashtari, A., Pourbakhsh, S.A., Ghaemmaghami, S., Looni, R., Pooladgar, A.R., Ali Shirudi, A., 2015. Isolation and identification of Mycoplasma agalactiae by culture and polymerase chain reaction (PCR) from affected sheep to Contagious agalactiae of Khuzestan province, Iran. Arch Razi Inst 70, 21-27.
Bergonier, D., Berthelot, X., Poumarat, F., 1997. Contagious agalactiae of small ruminants: current knowledge concerning epidemiology, diagnosis and control. Rev Sci Tech 16, 848-873.
Browning, G.F., Marenda, M.S., Noormohammadi, A.H., Markham, P.F., 2011. The central role of lipoproteins in the pathogenesis of mycoplasmoses. Vet Microbiol 153, 44-50.
De la Fe, C., Gutierrez, A., Poveda, J.B., Assuncao, P., Ramirez, A.S., Fabelo, F., 2007. First isolation of Mycoplasma capricolum subsp. capricolum, one of the causal agents of caprine contagious agalactia, on the island of Lanzarote (Spain). Vet J 173, 440-442.
Fleury, B., Bergonier, D., Berthelot, X., Peterhans, E., Frey, J., Vilei, E.M., 2002. Characterization of P40, a cytoadhesin of Mycoplasma agalactiae. Infect Immun 70, 5612-5621.
Kheirkhah, B., Pourbakhsh, S.A., Nadalian, M.G., Banani, M., Ashtari, A., 2011. Detection of Mycoplasma agalactiae by culture and polymerase chain reaction (PCR) methods from Iranian goats. Afr J Microbiol Res 13, 1668-1672.
Khezri, M., Pourbakhsh, S., Ashtari, A., Rokhzad, B., Khanbabaie, H., 2012. Isolation and prevalence of Mycoplasma agalactiae in Kurdish sheep in Kurdistan, Iran Vet World 5, 727-731.
Mahdavi, S., Salehi, T., Madani, R., Keyvanfar, H., 2009. Comparative study of homology of cytoplasmic membrane protein 40 KDa of Mycoplasma agalactiae in isolated strains in Iran. Afr J Microbiol Res 9, 528-532.
Momen, A.H., Roshdi Maleki, M., 2014. Identification of Mycoplasma agalactiae in Milk by Culture and PCR methods in Hamedan of Iran .Indian J Fund Appl Life Sci 4, 2175-2180
Nouvel, L.X., Marenda, M., Sirand-Pugnet, P., Sagne, E., Glew, M., Mangenot, S., et al., 2009. Occurrence, plasticity, and evolution of the vpma gene family, a genetic system devoted to high-frequency surface variation in Mycoplasma agalactiae. J Bacteriol 191, 4111-4121.
OIE, O.I.D.E., 2008. Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals. Contagious Agalactiae, Paris, France.
Oravcova, K., Lopez-Enriquez, L., Rodriguez-Lazaro, D., Hernandez, M., 2009. Mycoplasma agalactiae p40 Gene, a novel marker for diagnosis of contagious agalactiae in sheep by real-time PCR: assessment of analytical performance and in-house validation using naturally contaminated milk samples. J Clin Microbiol 47, 445-450.
Tola, S., Angioi, A., Rocchigiani, A.M., Idini, G., Manunta, D., Galleri, G., et al., 1997. Detection of Mycoplasma agalactiae in sheep milk samples by polymerase chain reaction. Vet Microbiol 54, 17-22.
van Kuppeveld, F.J., van der Logt, J.T., Angulo, A.F., van Zoest, M.J., Quint, W.G., Niesters, H.G., et al., 1992. Genus- and species-specific identification of mycoplasmas by 16S rRNA amplification. Appl Environ Microbiol 58, 2606-2615.
Zendulkova, D., Ball, H., Madanat, A., Lány, P., PospÍ, Z., 2004. Detection of Mycoplasma agalactiae Antigen in Sheep and Goats by Monoclonal Antibody Based Sandwich ELISA. Acta Veterinaria Brno 73, 461-464.
Zendulkova, D., Madanat, A., Lány, P., Rosenbergová, K., Pospísil, Z., 2007. Detection of Mycoplasma agalactiae by Polymerase Chain Reaction in Jordanian Sheep and Goat Herds. Acta Veterinaria Brno 76, 71-77. | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 2,484 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 3,388 |
||
