| تعداد نشریات | 287 |
| تعداد نشریات سازمان | 85 |
| تعداد شمارهها | 3,159 |
| تعداد مقالات | 35,108 |
| تعداد مشاهده مقاله | 50,528,795 |
| تعداد دریافت فایل اصل مقاله | 90,477,702 |
Absolute quantification of murine interleukine-4, interleukine- 10 and interferon-γ gene transcripts using Real Time PCR | ||
| Archives of Razi Institute | ||
| مقاله 7، دوره 70، شماره 2، مهر 2015، صفحه 119-125 اصل مقاله (257.23 K) | ||
| شناسه دیجیتال (DOI): 10.7508/ari.2015.02.007 | ||
| نویسندگان | ||
| M. Esmaelizad* 1؛ S. Jafari2؛ Alireza Rafiei3 | ||
| 1Central Laboratory Department, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran | ||
| 2Central Laboratory Department, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Karaj, Iran Molecular Cell Biology Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran | ||
| 3Molecular Cell Biology Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran | ||
| چکیده | ||
| The study of cytokines gene expression is quite important in various conditions of health and disease for the evaluation of clinical responses to new vaccination approaches. An absolute quantification is based on a calibration curve and production of standard controls to achieve more reliable results than in relative system. In this study we attempted to construct standard controls to evaluate the murine immune response. The number of 10 Balb/c mice immunized with hydatid cyst fluid subcutaneously with two week intervals to induce transcription of Th1 and Th2 related cytokines. Three Pairs of primers were designed to amplification of interleukine-4, interleukine-10 and interferon-γ by Oligo software. Partial sequences of three cytokine genes were cloned into pTZ57T vector. Three recombinant plasmids were purified and serial dilutions were prepared. Real time qPCR carried out using SYBR-Green I fluorescence dye and standard curves were provided by the 7500 ABI SDS software based on the exact concentration of dilutions and the amplification plots. Results showed that this method was able to evaluate the cytokines mRNA levels less than 0.01pg (~150 copy). We concluded that absolute real-time qPCR can be successfully applied to the quantification of antigen-induced cytokines. | ||
| کلیدواژهها | ||
| real time PCR؛ Cytokine؛ IL4؛ IL10؛ IFN؛ γ | ||
| عنوان مقاله [English] | ||
| کمیت سنجی مطلق رونویسی ژن اینترلوکین-4 ،اینترلوکین-10 واینترفرون- گامای موشی با روش Real Time PCR | ||
| نویسندگان [English] | ||
| مجید اسماعیل زاد1؛ شیوا جعفری2؛ علیرضا رفیعی3 | ||
| 1موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی | ||
| 2موسسه تحقفیقات واکسن و سرم سازی رازی و دانشگاه علوم پزشکی ساری | ||
| 3دانشگاه علوم پزشکی ساری | ||
| چکیده [English] | ||
| مطالعه ﺑﻴﺎﻥ سایتوکاینها ﺩﺭ ﺷﺮﺍﻳﻂ ﻣﺨﺘﻠﻒ ﺳـﻼﻣﺖ ﻭ ﺑﻴﻤــﺎﺭﻱ و برای ارزیابی پاسخهای ایمنی واکسنهای جدید بسیار مهم است. کمیت سنجی مطلق مبتنی بر رسم نمودار کالیبراسیون و تولید کنترل های استاندارد میباشد تا نتایج قابل اعتمادتری نسبت به سیستم های نسبی داشته باشد. در این مطالعه سه کنترل استاندارد برای سایتوکاینهای اینترلوکین 10، اینترلوکین4 و اینترفرون گاما به منظور انجام روش کمیت سنجی مطلق در مدل موشی ساخته شد. در این پژوهش تعداد 10 موش نژاد Balb/C با مایع کیست هیداتیک همراه با اجووان فروند بطور زیر جلدی سه بار با فاصله دو هفته به منظور القا سلولهایTh1، Th2ایمن شدند. سه جفت پرایمر اختصاصی جهت تکثیر اینترلوکین 4، اینترلوکین10 و اینترفرون گاما با استفاده از نرم افزار اولیگو طراحی شد. توالی های تکثیر شده از سه سایتوکاین دروکتور pTZ57R-T کلون شدند . پلاسمیدهای نوترکیب حاوی توالی های مورد نظر خالص شده و رقت های سریالی از آنها تهیه شد. واکنش Real time PCR در حضور سایبر گرین انجام شده نمودر استاندارد با نرم افزار7500 ABI SDS بر اساس غلظتهای سریال پلاسمیدهای نوترکیب ترسیم شد. نتایج این مطالعه نشان داد که این تست برای اندازه گیری میزان ترنسکریپشن سه سایتوکاین مورد مطالعه تا رقت کمتراز 0.01 پیکوگرم (حدودا 150 کپی) با راندمان بالا میتواند کارامد باشد. این تکنیک امکان بررسی کمی سایتوکاین های بیان شده بواسطه القا آنتی ژن را فراهم می کند. | ||
| کلیدواژهها [English] | ||
| real time PCR, سیتوکین, IL4, IL10, IFN, γ | ||
|
آمار تعداد مشاهده مقاله: 2,063 تعداد دریافت فایل اصل مقاله: 3,019 |
||